诺泽流体：葛根素纳米脂质体的制备及体外释放特性研究
2019-12-23
葛根素(Puerarin，Pue)是从豆科植物野葛［Puerarialobata(Willd.)Ohwi］、甘葛藤(Puerarin thomsoniiBenth．)的根中提取的异黄酮苷，具有广泛的药理作用。临床上主要用于心脑血管疾病的治疗，如心律失常、冠心病、心肌梗死、高血压、脑水肿等，同时也有增加脑血流量及冠脉血流量的作用。但上海诺泽流体提醒说，Pue亲脂性强、溶解度低、口服吸收差，生物利用度低，增加给药量易出现急性血管内溶血等不良反应，限制了其在临床中的应用。
纳米脂质体(nano-liposomes carriers，NLC)是由固体脂质纳米粒发展而来的一种新型载药系统。NLC通过向固态高熔点脂质中引入低熔点的液态脂质，将药物包裹或内嵌于脂质核中，形成粒径约为50～1000nm的脂质微粒。研究表明:NLC载药量高、药物泄漏少;NLC生理相容性好，对人体无不良反应;并且采用具有成熟工艺的高压均质法，便于进行工业化生产。NLC具有聚合物纳米粒的优点，可控制药物的释放、避免药物的降解以及具有良好的靶向性，发挥较好的治疗作用，减少药物的不良反应等。
因此，本研究采用高压均质法制备葛根素纳米脂质体(puerarin nano-liposomes carriers，Pue-NLC)，以包封率、载药量、粒径为指标，对各处方因素进行考察，采用正交设计优化处方，确定Pue-NLC的最佳处方，对其理化性质进行评价并考察其体外释放特性，为开发Pue新型给药系统提供了研究基础。
材料与仪器
葛根素(南京泽朗医药科技有限公司，含量99%)，葛根素对照品(中国食品药品检定研究院，含量99%)，单硬脂酸甘油酯(GP)、辛酸/癸酸三甘油酯(LLW)、山嵛酸甘油酯(Compritol)(法国GATTEFOSSE公司)，泊洛沙姆188(F68)(德国BASF公司)，硬脂酸(德国COGNIS公司)，大豆卵磷脂(Lecithin)(天津市光复精细化工研究所)，甲醇(美国Honeywell Burdick＆Jackson公司)，其他试剂均为国产分析纯;Optima MAX Ultracentrifuge 超速离心机(美国Beckman－Coulter公司)，Agilent－1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，FJ－200高速分散均质机(上海标本模型厂)，BEE高压均质机(上海诺泽流体)，Labconco冷冻干燥机(美国Labconco公司)，Nano－ZS90激光粒度仪(上海诺泽流体)，CP225D电子天平(德国Sarto-rius 公司)，H－7650日立透射电子显微镜(日本Hitachi公司); DF－101S集热式恒温搅拌器(巩义市英峪予华仪器厂) 。
方法与结果
1.油相的制备 将Pue，GP(或Compritol或SA)与LLW混合溶解后，置85℃水浴中，搅拌使其熔融。
纳米脂质体(nano-liposomes carriers，NLC)是由固体脂质纳米粒发展而来的一种新型载药系统。NLC通过向固态高熔点脂质中引入低熔点的液态脂质，将药物包裹或内嵌于脂质核中，形成粒径约为50～1000nm的脂质微粒。研究表明:NLC载药量高、药物泄漏少;NLC生理相容性好，对人体无不良反应;并且采用具有成熟工艺的高压均质法，便于进行工业化生产。NLC具有聚合物纳米粒的优点，可控制药物的释放、避免药物的降解以及具有良好的靶向性，发挥较好的治疗作用，减少药物的不良反应等。
因此，本研究采用高压均质法制备葛根素纳米脂质体(puerarin nano-liposomes carriers，Pue-NLC)，以包封率、载药量、粒径为指标，对各处方因素进行考察，采用正交设计优化处方，确定Pue-NLC的最佳处方，对其理化性质进行评价并考察其体外释放特性，为开发Pue新型给药系统提供了研究基础。
材料与仪器
葛根素(南京泽朗医药科技有限公司，含量99%)，葛根素对照品(中国食品药品检定研究院，含量99%)，单硬脂酸甘油酯(GP)、辛酸/癸酸三甘油酯(LLW)、山嵛酸甘油酯(Compritol)(法国GATTEFOSSE公司)，泊洛沙姆188(F68)(德国BASF公司)，硬脂酸(德国COGNIS公司)，大豆卵磷脂(Lecithin)(天津市光复精细化工研究所)，甲醇(美国Honeywell Burdick＆Jackson公司)，其他试剂均为国产分析纯;Optima MAX Ultracentrifuge 超速离心机(美国Beckman－Coulter公司)，Agilent－1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，FJ－200高速分散均质机(上海标本模型厂)，BEE高压均质机(上海诺泽流体)，Labconco冷冻干燥机(美国Labconco公司)，Nano－ZS90激光粒度仪(上海诺泽流体)，CP225D电子天平(德国Sarto-rius 公司)，H－7650日立透射电子显微镜(日本Hitachi公司); DF－101S集热式恒温搅拌器(巩义市英峪予华仪器厂) 。
方法与结果
1.油相的制备 将Pue，GP(或Compritol或SA)与LLW混合溶解后，置85℃水浴中，搅拌使其熔融。
2.水相的制备将F68加适量蒸馏水，置85℃水浴中，溶解分散。
3.Pue-NLC的制备将油相置于85℃水浴，在搅拌条件下将水相逐渐加入油相，继续搅拌10min。将熔融体与水相混合，并高速剪切1min，使其形成热初乳，保温除去气泡。将热初乳液输入高压均质机中均质，设置一级、二级均质压力及均质循环次数。均质完毕，4℃快速冷却，即得Pue-NLC。
含量测定
1.色谱条件；2.溶液的配制；3.专属性试验。
讨论
由于葛根素具有较高的脂溶性，可以包裹或内嵌于纳米脂质体中，因此具有较高的包封率和载药量。纳米脂质体主要应用于亲脂性药物，亦可将亲水性药物通过酯化等方法制成脂溶性强的前体药物后再制备。但是纳米脂质体也存在着诸多不足，如凝胶化现象、过冷态、药物析出等，为了解决这些问题，还需在分子水平上进一步了解纳米脂质体的结构特征。
微射流高压均质法是目前制备纳米脂质体的主要方法，与许多制备聚合物纳米粒的方法相比，此法可避免采用对人体有害的附加有机溶剂(如二氯甲烷、氯仿等)，操作简便，易于控制，适于进行工业化生产。预实验中亦尝试溶剂乳化蒸发法、溶剂扩散法及高速搅拌超声法制备纳米脂质体，但溶剂用量大、操作较繁琐，且粒径分布较宽。以高压均质法制备可有效避免有机溶剂污染，且粒径小、包封率和载药量均较高。对脂溶性药物而言，部分药物以吸附的方式与载体结合，制备过程中若均质功率太大，结合的药物易从载体脱落;若均质不充分，则药物难以与载体结合完全，包封率降低粒径增大，故均质压力和循环次数皆需合理控制。此外，可通过将均质完毕的Pue-NLC胶体溶液迅速冷却，提高水相的黏性，减少药物从载体中析出，从而提高包封率。
上海诺泽流体表示，本研究采用高压均质法制备Pue-NLC，既可以用于静脉注射，也可以应用于口服给药系统，改善葛根素的口服吸收性，从而提高葛根素的口服生物利用度，并达到药物缓、控释目的，为葛根素新型给药系统的开发提供理论基础和实践指导。
含量测定
1.色谱条件；2.溶液的配制；3.专属性试验。
讨论
由于葛根素具有较高的脂溶性，可以包裹或内嵌于纳米脂质体中，因此具有较高的包封率和载药量。纳米脂质体主要应用于亲脂性药物，亦可将亲水性药物通过酯化等方法制成脂溶性强的前体药物后再制备。但是纳米脂质体也存在着诸多不足，如凝胶化现象、过冷态、药物析出等，为了解决这些问题，还需在分子水平上进一步了解纳米脂质体的结构特征。
微射流高压均质法是目前制备纳米脂质体的主要方法，与许多制备聚合物纳米粒的方法相比，此法可避免采用对人体有害的附加有机溶剂(如二氯甲烷、氯仿等)，操作简便，易于控制，适于进行工业化生产。预实验中亦尝试溶剂乳化蒸发法、溶剂扩散法及高速搅拌超声法制备纳米脂质体，但溶剂用量大、操作较繁琐，且粒径分布较宽。以高压均质法制备可有效避免有机溶剂污染，且粒径小、包封率和载药量均较高。对脂溶性药物而言，部分药物以吸附的方式与载体结合，制备过程中若均质功率太大，结合的药物易从载体脱落;若均质不充分，则药物难以与载体结合完全，包封率降低粒径增大，故均质压力和循环次数皆需合理控制。此外，可通过将均质完毕的Pue-NLC胶体溶液迅速冷却，提高水相的黏性，减少药物从载体中析出，从而提高包封率。
上海诺泽流体表示，本研究采用高压均质法制备Pue-NLC，既可以用于静脉注射，也可以应用于口服给药系统，改善葛根素的口服吸收性，从而提高葛根素的口服生物利用度，并达到药物缓、控释目的，为葛根素新型给药系统的开发提供理论基础和实践指导。
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